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农业论文

高温胁迫处理香菇杂交子育种初探

摘要:以香菇(Lentinulaedodes)L9319和香菇9608的双核茵丝,分别与香菇L808的单核茵丝进行双单杂交,再将杂交子放于高温环境进行逆境胁迫试验。逆境处理后的香菇杂交子大部分出现茵丝失活,部分能够继续生长的杂交子扩大培养后,其中大部分出现茵丝生长缓慢或不延伸的现象,最后获得11株杂交子进入出菇试验。栽培结果表明高温胁迫处理的部分香菇杂交子表现出高产、高温出菇等优良性状。

关键词:香菇,双单杂交,逆境胁迫,杂交子

湖北省十堰市房县是我国最早进行香菇(Lentinulaedodes)栽培的地区之一,“房县香菇”、“房县小花菇”均为国家地理标志产品。香菇L9319一直是反季节栽培的主要品种,随着香菇L808的大面积推广逐渐替代了香菇L9319,十堰地区形成了以香菇9608为主要秋冬菇品种,L808为反季节夏季栽培品种的栽培模式。十堰市是湖北省少数能进行夏季香菇栽培的地区之一,夏季香菇以鲜销为主,而且价格可观,菇农鲜菇批发价最高可以卖到24元·kg~,因此进一步选育适合夏季生长的夏季香菇品种是非常必要的。

双单杂交技术是由“布勒现象”11】{}亍生而来,是1种目的性较强的常规育种手段,香菇的有性生殖方式为异宗结合。利用双单杂交技术,将具有优良特性的香菇双核菌丝,对需要改良菌株的单核菌丝进行双单配对,形成双核菌丝,从而选育出新的杂交菌株。

高温胁迫导致包括香菇在内的各种生物体产生一系列生理紊乱,是生理学研究的重要领域之一㈣。本研究使用双单杂交技术,先对亲本菌株进行杂交,再对所得杂交子菌丝进行高温逆境胁迫处理,获得一些菌丝可以正常生长的杂交子,随之进行出菇对比试验,初步筛选出了具有利用价值的杂交子。

l材料与方法

1.1供试菌株

香菇L808、L9319引自浙江省丽水市大山菇业研究开发有限公司,香菇9608引自河南西峡县真菌研究所。

1.2培养基

单孢子分离培养基:PDA培养基。双单杂交培养基:PDA培养基。逆境胁迫培养基:木屑80%、麸皮19%、石膏1%,含水量50%~55%,试管尺寸18minxl80mm。

1.3菌种配方

木屑60%、细木屑20%、麸皮18%、石膏1%、石灰1%,含水量50%一55%。

1.4栽培料配方

木屑80%、麸皮19%、石膏l%,含水量500/0--55%。

1.5双单杂交

收集L808的单核菌丝,与供体L9319和9608的双核菌丝分别对峙培养于同一PDA试管中,双核菌丝位于试管底部,单核菌丝位于试管中部,菌丝块之间相差4cm.5cm,25℃培养lOd一15d后,挑取单核菌丝靠近试管前端的边缘菌块镜检,具有锁状联合者视为杂交成功,并于试管中进行扩大培养。

1.6逆境胁迫处理

将扩大培养的杂交子菌丝接入试管木屑培养基中,棉花塞封口,25。C暗培养10d,待菌丝萌发延伸,将菌丝至于35。C培养箱中进行培养直到菌丝长满试管,培养箱为电热恒温培养箱(无水盘加湿)。

1.7杂交新菌株的筛选

将菌丝可以长满试管的杂交子直接制种,28℃暗培养30d~40d,然后淘汰菌丝生长过慢和无法萌发延伸的杂交子。

1.8栽培试验和子实体形态、形状的观察

按上述培养料配方,采用地面斜靠栽培模式进行对比试验,每个品种设3次重复,代料干重1.2妇·袋一。记录各杂交子的污染率和子实体产量,计算其生物学效率,对每个杂交子子实体随机取样,测定各杂交子菌盖厚度、菌盖直径和菌柄直径。

2结果与分析

2.1双单杂交

将L9319和9608分别与收集的80份L808单核菌丝进行双单杂交,获得L9X8(L9319与L808双单杂交)杂交子63株,获得9X8(9608与L808双单杂交)杂交子56株。

2.2逆境胁迫处理结果

逆境胁迫处理后共获得31株杂交子,其中L9X8有22株,9X8有9株。制种后获得15株杂交子菌种,其中L9X8有12株,9X8有3株。

2.3栽培试验结果

2.3.1杂交子养菌结果的比较

表1列出了各杂交子在不同时期的污染情况。由表1可知,大部分杂交子菌丝抗杂能力很差,污染集中表现在刺孑L后,只有L9X8—3和L9X8—40的菌丝生长良好。

2.3.2进入出菇期杂交子特征

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表2列出了能够出菇的杂交子的出菇分布情况和产量。

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由表2可见,大部分杂交子产量很低,且集中在前2潮出菇,杂交子L9X8—3呈爆发性出菇,且产量最高,均产达到988.9g·棒~,而杂交子L9X8—7在第3潮开始出菇。经过逆境处理能够正常生长的杂交子菌丝吃料情况无明显差异。产量方面除L9X8—3外,其余杂交子产量均低于对照。部分杂交子子实体特征见图1、图2和表3。

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从表3、图1和图2可以看出,经过逆境处理后,部分杂交子子实体特征表现为L9X8—7子实体大量出现畸形,经测量菌柄平均直径达到24.73mm,菌盖不易开伞;9X8—40子实体菇形大,易开伞,容易形成片菇。

3讨论

单单杂交、双单杂交、多孢自交已广泛使用在食用菌育种中,本研究经过逆境胁迫处理所获杂交子L9X8—3呈现出爆发性出菇、子实体丛生、菌盖面黑、产量高等特点,高产的特征值得将其作为育种材料进一步进行回交试验;9X8—40子实体特征为板菇(俗称的大片菇),虽然这一特点不管是在鲜销市场还是干货市场均不被看好,但其比较符合美国香菇工厂化品种的需求,拥有一定的潜在价值;杂交子L9X8—7在第3潮开始出菇(7月份),此高温出菇的特征值得将其作为育种材料进一步研究,而且其菇柄肥厚,很适合用于香菇加工,随着香菇产业的不断发展,该品种同样拥有一定的潜在价值。

本研究采用对杂交菌株进行高温逆境胁迫的处理方式。结果表明,所获部分杂交子在子实体形态方面有了明显改变,至于获得杂交菌株性状能否遗传,则有待于进一步研究。

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